禁停标志牌:询问一个关于SARS的问题

SARS病毒的分子生物学诊断

SARS的病因已经找到，是由一种新的冠状病毒感染引起的。已经证实对于SARS病人采取隔离的措施可以有效地控制非典的传播，因此如何准确地判断一个人是否受到冠状病毒的感染是非常重要的。只有进行准确地诊断，才既能有效地控制传染源。又能不影响正常人员的日常工作与生活。

目前对于冠状病毒感染主要有以下三种诊断方法，分别是：

1. 血清学方法：ELISA（IgM/IgA）方法能够可靠地检出出现临床症状20天后SARS病人血清中的病毒抗体。某些病人在14-21天时，已经可以检测到抗体。

2. 细胞培养方法：利用VERO细胞来检测SARS病人的呼吸道分泌物和血液样品，阳性结果则表示SARS病人感染了冠状病毒。

3. 分子生物学方法：主要是运用PCR的方法对血液、粪便、呼吸道分泌物、痰液、唾液和漱口液等临床样本的核酸提取物进行体外的扩增后，进行定性与定量的分析。

针对目前的状况，血清学方法与细胞培养方法在临床上的应用都存在着一定的问题与困难。虽然细胞培养方法是诊断有无冠状病毒感染最可靠的方法，但是由于该方法所需的实验条件、诊断的周期等因素都限制了在临床上广泛地采用细胞培养方法。血清学方法利用抗原、抗体的特异性反应进行诊断，但由于目前对冠状病毒表面的蛋白如S、M、N蛋白还处于研究、分析其特异表位的阶段，所以还不能制备出ELISA方法所需的特异性单抗。

因此，虽然PCR诊断方法存在假阴性、假阳性等缺陷，但由于其速度快、应用范围广的特点还是目前进行冠状病毒感染诊断最为可行的方法。该方法的原理是针对冠状病毒的基因组序列设计出特异性引物，对样本的核酸提取物进行扩增，通过对扩增产物的分析判断是否被冠状病毒感染。

一. 吉泰公司针对广大进行SARS诊断试剂盒研究开发的厂家推出了用于生产PCR试剂盒的各种所需原料与试剂：

dNTPs

货号 包装 价格（1-4） （5-10） （10+）

GP0003 40μmol/each 385 350 305

GP0005 10μmol/each 145 130 110

进口原装产品，纯度大于99%，HPLC纯化，每个包装中含4管，分别为dATP、dCTP、dGTP、dTTP

UNG酶（Uracil-DNA-Glycosylase）

货号 包装 价格（1-4） （5-10） （10+）

GP0009 100U 300 250 220

GP0011 500U 1150 1030 900

GP0013 1000U 2100 1890 1700

该酶用于PCR试剂盒的防污染系统，可以消化含有dUTP的双链DNA。

DNA聚合酶

货号 包装 价格（1-4） （5-10） （10+）

GP0015 100U 50 45 38

GP0017 500U 225 200 170

上述DNA聚合酶都具有5’-3’的聚合功能、5’-3’的外切功能，不含有其他核酸酶，可以用于定量PCR试剂盒。

热启动PCR聚合酶

货号 包装 参考单价（RMB）

AB-0908 250U（含有单独的MgCl2） 1462。5

AB-0908/b 2500U（含有单独的MgCl2） 12675

AB-1908 250U（缓冲液内含15mM的MgCl2） 1462。5

AB-1908/b 2500U（缓冲液内含15mM的MgCl2） 12675

AB-1057 250U（含高效缓冲液与单独的MgCl2） 1462。5

AB-1057/b 2500U（含高效缓冲液与单独的MgCl2） 12675

该酶进行了化学的修饰，在常温下没有聚合活性，在95˚C保温15分钟后出现聚合酶活性，因此可以有效地防止PCR过程中非特异的扩增，避免假阳性的出现。

MMuLV逆转录聚合酶

货号 包装 参考价格（RMB）

AB-0322 10000U 1331

AB-0322/b 50000U 5325

该酶可以用于cDNA合成与RT-PCR，RNase H的活性很低，不会引起RNA的降解。

AMV逆转录聚合酶

货号 包装 参考价格（RMB）

AB-0321 500U 1835

AB-0321/b 1000U 3268

该酶也用于cDNA合成与RT-PCR，具有很好的特异性与热稳定性。

REVERSE-IT逆转录聚合酶

货号 包装 参考价格（RMB）

AB-0914 5000U 2914

AB-0914/b 10000U 5192

该产品实际是MMuLV逆转录聚合酶与AMV逆转录聚合酶的混合物，利用了MMuLV逆转录聚合酶的低RNase H活性与AMV逆转录聚合酶良好的热稳定性，并在上述2个性能间达到了很好的平衡。该酶在57˚C以上仍可进行RT-PCR，可以避免由于二级结构引起的扩增失败，可扩增出100fg的RNA分子。

二. 针对广大的科研用户吉泰推出了一步法的RT-PCR试剂盒，使用者在获得SARS的RNA分子后使用该试剂盒可以方便、快速地得到相应的ssDNA分子。

BD TITANIUM One-Step RT-PCR Kit

货号 包装 参考价格（RMB）

639503 30次 1663

639504 100次 4688

该试剂盒进行RT-PCR时与传统的方法相比，最大的不同在于RT的温浴与后续的PCR扩增在一个试管内完成，既简化了操作，又防止了多次实验步骤导致的交叉污染。试剂盒采用热启动技术，有效解决非特异扩增问题；具有高度的灵敏度，可以从10pg的总RNA中扩增到目的片段。

三. 目前PCR诊断试剂盒在技术上已经完成了从定性到定量的过度，定量技术的出现使得诊断结果对于临床更加有意义。针对这一状况，吉泰公司推出了RNA定量试剂盒系列产品。该系列产品具有以下优点：

试剂盒中包括了所有定量RT-PCR所需的试剂，并且采用Master Mix的方式提供，方便使用者的操作；

试剂盒中的酶学系统采用REVERSE-IT逆转录聚合酶与PCR聚合酶，具有良好的检测灵敏度；

该系列提供多种规格的产品，能与所有的定量PCR仪器兼容，应用范围广。

Absolute QRT-PCR Mixes产品系列1

货号 包装

AB-1205/a 100次

AB-1205/b 800次

AB-1206 200次

AB-1207/a 100次

AB-1207/b 800次

AB-1208 200次

系列1的产品内不含有校正荧光Rox，适用于无需使用校正荧光的定量PCR仪。后三种试剂盒内用dUTP替代了dTTP，与UNG连用可以防止污染。

Absolute QRT-PCR Mixes产品系列2

货号 包装

AB-1209/a 100次

AB-1209/b 800次

AB-1210 200次

AB-1211/a 100次

AB-1211/b 800次

AB-1212 200次

系列2的产品内不含有校正荧光Rox，适用于需要使用校正荧光的定量PCR仪。后三种试剂盒内用dUTP替代了dTTP，与UNG连用可以防止污染。该系列产品中的Rox已经加入了欢缓冲液体系，其终浓度为500nm。

Absolute QRT-PCR Mixes产品系列3

货号 包装

AB-1213/a 100次

AB-1213/b 800次

AB-1214 200次

AB-1215/a 100次

AB-1215/b 800次

AB-1216 200次

系列3的产品与系列2的产品大致相同，只是校正荧光Rox为单独包装，使用者可以根据自己实验的需求来决定是否用Rox以及其在反应体系中的终浓度。后三种试剂盒内用dUTP替代了dTTP，与UNG连用可以防止污染。