滁州市湖心路小学:中成药类的降糖药里面加了化学降糖如格列本脲等如何用简单的化学方法检验出来？

中 药 保 健 品 中 非 法 掺 入 格 列 本 脲 的 检 测
　　夏 铮 铮 1＊ ， 杨 成 钢 2， 张 小 松 2， 周 琳 2， 范 琦 1＃ 1? 重 庆 医 科 大 学 ， 重 庆 市 400016； 2? 重 庆 市 药 品 检 验 所 ， 重 庆 市 400015
　　中图分类号: R927? 11 文献标志码: A 文章编号: 1001－ 0408（ 2006） 04－ 0314－ 03
　　摘要:建 立 中 药 保 健 品 中 非 法 掺 入 化 学 成 分 格 列 本 脲 的 定 性 、 定 量 检 测 方 法 ， 为 药 监 、 药 检 部 门 提 供 参 考 。 方 法 ： 采 用 薄 层 色 谱 法 、 高 效 液 相 色 谱 法 对 怀 疑 掺 有 格 列 本 脲 的 荞 芪 胶 囊 的 提 取 物 进 行 分 离 分 析 ， 并 采 用 高 效 液 相 色 谱 － 二 级 管 阵 列 检 测 法 及 直 接 电 喷 雾 四 级 杆 质 谱 技 术 对 其 进 行 定 性 鉴 别 ， 另 采 用 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 其 中 格 列 本 脲 的 含 量 。 结 果 ： 供 试 品 荞 芪 胶 囊 A、 荞 芪 胶 囊 B均 检 出 格 列 本 脲 ， 其 含 量 分 别 为 1? 51、 0? 55mg/粒 。 结 论 ： 本 方 法 专 属 性 强 、 灵 敏 度 高 、 操 作 简 便 ， 可 作 为 监 测 掺 有 格 列 本 脲 中 药 保 健 品 的 有 效 方 法 。
　　关键词:中 药 保 健 品 ； 荞 芪 胶 囊 ； 格 列 本 脲 ； 薄 层 色 谱 法 ； 高 效 液 相 色 谱 法 ； 质 谱 法

　　格 列 本 脲 （ Glibenclamide， 又 名 优 降 糖 ） 是 第 2代 磺 脲 类 口 服 降 糖 药 的 代 表 ， 其 疗 效 特 点 为 降 糖 作 用 强 、 持 续 时 间 长 [1]。 目 前 ， 某 些 中 药 保 健 品 生 产 厂 家 为 增 强 降 糖 效 果 ， 在 其 生 产 的 中 药 保 健 品 中 非 法 掺 入 化 学 药 品 格 列 本 脲 。 为 有 效 打 击 这 种 制 假 掺 伪 的 不 法 行 为 ， 保 障 人 民 群 众 的 用 药 安 全 ， 笔 者 参 考 有 关 文 献 [2～ 7]， 建 立 了 检 测 中 药 保 健 品 中 非 法 掺 入 格 列 本 脲 成 分 的 方 法 ， 并 运 用 该 方 法 证 实 某 厂 家 生 产 的 中 药 保 健 品 荞 芪 胶 囊 中 违 禁 掺 有 成 分 格 列 本 脲 。 本 法 对 中 药 保 健 品 中 是 否 掺 有 格 列 本 脲 能 快 速 、 准 确 地 作 出 判 断 ， 可 供 各 药 监 、 药 检 部 门 开 展 工 作 时 参 考 。

　　1 仪 器 与 试 药

　　1? 1 仪 器

　　LC－ 2010Avp型 高 效 液 相 色 谱 仪 （ 带 自 动 进 样 器 ） ， 包 括 SPD－ M10Avp二 极 管 阵 列 检 测 器 （ 日 本 岛 津 公 司 ） ； ZQ2000型 四 级 杆 质 谱 仪 （ 美 国 Waters公 司 ） ； CSB－ 5L－ 180型 超 声 清 洗 器 （ 天 津 市 考 德 斯 科 技 有 限 公 司 ） 。

　　1? 2 试 药

　　格 列 本 脲 对 照 品 （ 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 ， 批 号 ： 10135－ 0103） ； 荞 芪 胶 囊 A、 B（ 北 京 市 某 医 药 保 健 品 厂 ， 批 号 ： 20040712） ； 硅 胶 G（ 青 岛 海 洋 化 工 厂 ， 批 号 ： 9514） ； 甲 醇 为 色 谱 纯 ， 水 为 超 纯 水 ， 其 余 试 剂 均 为 分 析 纯 。

　　2 方 法 与 结 果

　　2? 1 薄 层 色 谱 定 性 鉴 别

　　分 别 取 荞 芪 胶 囊 A、 B样 品 内 容 物 3? 0g， 各 置 于 锥 形 瓶 中 ， 加 氯 仿 50ml， 超 声 处 理 30min， 过 滤 ， 滤 渣 和 滤 器 用 氯 仿 20ml分 次 洗 涤 ， 合 并 洗 液 与 滤 液 ， 置 于 水 浴 上 蒸 干 ， 残 渣 加 氯 仿 2ml使 溶 解 ， 即 得 供 试 品 溶 液 A、 B。 另 取 格 列 本 脲 对 照 品 ， 加 氯 仿 制 成 浓 度 为 1mg/ml的 溶 液 ， 即 得 对 照 品 溶 液 。 按 薄 层 色 谱 法 试 验 ， 吸 取 上 述 溶 液 各 5μ l， 分 别 点 于 同 一 以 羧 甲 基 纤 维 素 钠 为 粘 合 剂 的 硅 胶 GF254薄 层 板 上 ， 以 氯 仿 － 环 己 烷 － 乙 醇 － 冰 醋 酸 （ 8∶ 13∶ 1∶ 1） 为 展 开 剂 ， 上 行 展 开 ， 取 出 ， 晾 干 ， 置 于 紫 外 灯 254nm波 长 下 检 视 ， 结 果 供 试 品 在 与 格 列 本 脲 对 照 品 色 谱 相 应 的 位 置 上 显 相 同 颜 色 的 斑 点 ， 表 明 供 试 品 中 检 出 了 格 列 本 脲 ， 色 谱 详 见 图 1。

　　2? 2 高 效 液 相 色 谱 定 性 鉴 别

　　2? 2? 1 色 谱 条 件 ： 色 谱 柱 为 DiamonsilTM C18（ 250mm× 4? 6mm， 5μ m） ， 流 动 相 为 甲 醇 － 磷 酸 二 氢 铵 溶 液 （ 500∶ 300； 取 磷 酸 二 氢 铵 3? 5 507g， 加 水 600ml溶 解 ， 用 磷 酸 调 节 pH值 至 3? 50± 0? 02） ， 测 定 波 长 为 274nm， 流 速 为 1? 0ml/min， 柱 温 为 25℃ ， 进 样 量 为 10μ l。 理 论 塔 板 数 按 格 列 本 脲 峰 计 应 大 于 3 000。

　　2? 2? 2 对 照 品 溶 液 的 制 备 ： 准 确 称 取 格 列 本 脲 对 照 品 适 量 ， 加 氯 仿 溶 解 成 浓 度 为 0? 1mg/ml的 溶 液 ， 即 得 。

　　2? 2? 3 供 试 品 溶 液 的 制 备 ： 分 别 取 荞 芪 胶 囊 A、 B各 20粒 内 容 物 ， 研 细 ， 准 确 称 取 约 0? 6g， 置 于 锥 形 瓶 中 ， 加 氯 仿 50ml， 超 声 处 理 30min， 过 滤 ， 滤 渣 和 滤 器 用 氯 仿 20ml分 次 洗 涤 ， 合 并 洗 液 与 滤 液 ， 置 于 水 浴 上 蒸 干 ， 残 渣 加 甲 醇 10ml分 次 溶 解 ， 转 移 至 25ml容 量 瓶 中 ， 以 流 动 相 洗 涤 容 器 及 残 渣 数 次 ， 洗 液 合 并 至 容 量 瓶 中 ， 用 流 动 相 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 即 分 别 得 供 试 品 溶 液 A、 B。

　　2? 2? 4 鉴 别 反 应 ： 精 密 吸 取 “ 2? 2? 2” 项 下 对 照 品 溶 液 和 “ 2? 2? 3” 项 下 供 试 品 溶 液 A、 B， 按 “ 2? 2? 1” 项 下 色 谱 条 件 注 入 高 效 液 相 色 谱 仪 ， 依 法 测 定 。 结 果 ， 供 试 品 A、 B色 谱 中 出 现 与 对 照 品 色 谱 保 留 时 间 相 同 的 色 谱 峰 ， 另 用 二 极 管 阵 列 检 测 器 进 一 步 确 认 此 色 谱 峰 为 格 列 本 脲 ， 色 谱 详 见 图 2、 图 3。

　　2? 3 直 接 电 喷 雾 四 级 杆 质 谱 技 术 定 性 鉴 别

　　2? 3? 1 质 谱 条 件 ： 采 用 电 喷 雾 离 子 化 源 （ ESI） ， 以 正 离 子 检 测 ， 其 中 扫 描 范 围 为 100? 00～ 320? 00m/s。

　　2? 3? 2 质 谱 测 定 ： 取 “ 2? 2? 2” 、 “ 2? 2? 3” 项 下 溶 液 ， 依 法 测 定 ， 结 果 供 试 品 A、 B质 谱 中 出 现 与 对 照 品 质 谱 相 同 的 分 子 离 子 峰 （ 质 荷 比 为 494） ， 从 而 进 一 步 确 认 供 试 品 A、 B中 添 加 了 格 列 本 脲 ， 质 谱 详 见 图 4。

　　2? 4 定 量 测 定

　　2? 4? 1 线 性 关 系 考 察 ： 准 确 称 取 格 列 本 脲 对 照 品 10mg， 置 于 25ml容 量 瓶 中 ， 用 流 动 相 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 。 按 “ 2? 2? 1” 项 色 谱 条 件 分 别 进 样 3、 5、 10、 15、 20、 25、 30、 50μ l， 记 录 色 谱 ， 以 峰 面 积 积 分 值 （ Y） 对 浓 度 （ X） 进 行 线 性 回 归 ， 得 回 归 方 程 Y=7? 090× 103X＋ 3? 374× 103（ r=0? 9 995） 。 结 果 ， 格 列 本 脲 进 样 量 在 1? 2μ g～ 20? 0μ g范 围 内 与 峰 面 积 积 分 值 线 性 关 系 良 好 。

　　2? 4? 2 精 密 度 试 验 ： 取 同 一 对 照 品 溶 液 ， 按 “ 2? 2? 1” 项 下 色 谱 条 件 ， 连 续 进 样 6次 。 结 果 ， 格 列 本 脲 峰 面 积 积 分 值 的 相 对 标 准 差 为 0? 12％ ， 表 明 方 法 精 密 度 良 好 。

　　2? 4? 3 稳 定 性 试 验 ： 取 “ 2? 2? 3” 项 下 供 试 品 A、 B溶 液 ， 分 别 于 0、 2、 4、 8、 10、 12h时 进 样 测 定 。 结 果 ， 格 列 本 脲 峰 面 积 积 分 值 的 相 对 标 准 差 为 1? 3％ ， 表 明 在 12h内 基 本 稳 定 。

　　2? 4? 4 最 低 检 测 限 和 定 量 限 考 察 ： 以 流 动 相 为 空 白 溶 液 ， 与 一 定 浓 度 的 对 照 品 溶 液 分 别 进 样 ， 输 入 空 白 溶 液 的 噪 音 水 平 和 对 照 品 溶 液 的 进 样 量 后 ， 仪 器 自 动 分 析 显 示 ， 信 噪 比 （ S/N） 为 3? 0时 ， 检 测 限 为 7ng； S/N为 10? 0时 ， 定 量 限 为 24ng。

　　2? 4? 5 加 样 回 收 率 试 验 ： 准 确 称 取 已 知 含 量 的 荞 芪 胶 囊 A、 B各 约 3g， 各 准 确 加 入 高 、 中 、 低 不 同 浓 度 的 格 列 本 脲 对 照 品 溶 液 ， 按 “ 2? 4? 6” 项 下 方 法 测 定 含 量 ， 计 算 回 收 率 ， 结 果 荞 芪 胶 囊 A、 B的 平 均 回 收 率 分 别 为 100? 1％ （ RSD=0? 6％ ， n=9） 、 99? 7％ （ RSD=0? 9％ ， n=9） 。

　　2? 4? 6 样 品 含 量 测 定 ： 分 别 精 密 吸 取 “ 2? 2? 2” 项 下 对 照 品 溶 液 和 “ 2? 2? 3” 项 下 供 试 品 A、 B溶 液 ， 按 “ 2? 1” 项 下 色 谱 条 件 注 入 高 效 液 相 色 谱 仪 ， 记 录 色 谱 ， 按 外 标 法 以 峰 面 积 计 算 。 结 果 ， 供 试 品 中 格 列 本 脲 含 量 为 ： 胶 囊 A1? 51mg/粒 ； 胶 囊 B0? 55mg/粒 。

　　3 讨 论

　　薄 层 色 谱 分 离 检 视 只 能 初 步 判 断 格 列 本 脲 是 否 存 在 ， 最 终 判 断 是 否 确 是 格 列 本 脲 尚 需 进 一 步 试 验 证 实 。 采 用 高 效 液 相 － 二 极 管 阵 列 检 测 法 ， 通 过 保 留 时 间 和 紫 外 图 谱 的 比 较 ， 对 证 实 非 法 掺 入 格 列 本 脲 起 到 决 定 性 作 用 。 有 条 件 者 再 采 用 高 效 液 相 色 谱 － 质 谱 联 用 或 直 接 电 喷 雾 四 级 杆 质 谱 技 术 等 手 段 深 入 分 析 ， 将 更 进 一 步 确 保 结 果 准 确 无 误 。

　　荞 芪 胶 囊 说 明 书 中 称 本 品 主 要 成 分 为 荞 麦 、 黄 芪 、 山 楂 、 葛 根 、 女 贞 子 、 五 味 子 ， 属 天 然 植 物 成 分 ， 应 不 含 格 列 本 脲 。 根 据 《 中 华 人 民 共 和 国 药 品 管 理 法 》 第 四 十 八 条 规 定 ， 在 中 成 药 中 非 法 掺 入 西 药 成 分 ， 应 作 假 药 论 处 。

　　目 前 ， 笔 者 检 出 降 糖 中 药 保 健 品 中 非 法 掺 入 格 列 本 脲 的 除 荞 芪 胶 囊 外 ， 还 有 糖 尿 乐 胶 囊 、 降 糖 宁 胶 囊 和 降 糖 胶 囊 ， 表 明 这 并 非 个 别 现 象 ， 有 关 部 门 应 加 强 对 此 类 产 品 的 查 处 。

　　参 考 文 献

　　[1] 朱 才 娟 ， 陶 霞 ， 邓 渝 林 ， 等 ? 4种 口 服 降 糖 药 治 疗 糖 尿 病 的 成 本 － 效 果 分 析 [J]? 中 国 药 房 ， 2004， 15（ 1） ： 32?

　　[2] 张 穗 ， 薛 漓 ， 张 涛 ， 等 ? 降 血 糖 和 治 鼻 炎 中 成 药 中 擅 自 添 加 西 药 的 检 测 [J]? 中 国 药 品 标 准 ， 2003， 4（ 5） ： 37?

　　[3] 肖 志 梅 ， 灵 伸 元 ， 代 东 梅 ? 2型 糖 尿 病 口 服 治 疗 药 物 研 究 进 展 [J]? 上 海 医 药 情 报 研 究 ， 2004， 73： 5?

　　[4] 吴 泽 君 ， 张 国 浩 ， 王 爱 良 ? 糖 尿 乐 胶 囊 中 格 列 本 脲 的 测 定 [J]? 中 国 药 事 ， 2004， 18（ 12） ： 758?

　　[5] 张 启 明 ， 尹 华 ， 黄 海 伟 ， 等 ? 检 查 中 药 中 非 法 掺 入 枸 橼 酸 西 地 那 非 的 方 法 研 究 [J]? 药 物 分 析 杂 志 ， 2002， 22（ 4） ： 315?

　　[6] 李 敏 ， 王 美 菡 ， 李 春 盛 ， 等 ? 特 定 食 品 中 盐 酸 西 布 曲 明 的 检 测 [J]? 中 国 公 共 卫 生 杂 志 ， 2003， 19（ 12） ： 1 520?

　　[7] 国 家 药 典 委 员 会 编 ? 中 华 人 民 共 和 国 药 典 （ 二 部 ） [S]? 2005年 版 ? 北 京 ： 化 学 工 业 出 版 社 ， 2005： 595?

　　（ 收 稿 日 期 ： 2005－ 03－ 01 修 回 日 期 ： 2005－ 05－ 01）