链家地产怎么加盟:实验设计:消除环状DNA载体上的酶切位点

来源:百度文库 编辑:查人人中国名人网 时间:2024/05/05 09:23:09
某环状DNA载体上有一酶切位点,要从该载体切除该识别位点,且该位点位于某gene内,不能是其gene失活。
要求:实验原理(关键),器材,步骤(关键)
“不能是其gene失活”写错了个字,应该是“不能使其gene失活”
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用dna切割酶将特定片段切掉,就可以了!不过每次只能切下特定的点
现在的高中教材上就有
www.yeeta.com

不好办啊
切了就会失活啊,如果这个基因在表达的时候,这段属于内含子,不会表达的话,那就行了。
呵呵,没怎么做过这种得,帮不了你太大忙了,不好意思啊

我知道!我们生物书上有~
>限制性核酸内切酶的命名
用属名的头一个字母和种名的头两个字母,组成3个字母的略语表示寄主菌的物种名称,如大肠杆菌(Escherichia coli)用Eco表示,流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)用Hin表示;如有株名,再加上一个字母,一种特殊的菌株,具有几个不同的限制与修饰体系,则以罗马数字表示在该菌株中发现某种酶的先后次序。
例如:从流感嗜血杆菌d株(Haemophilus influenzae d)中先后分离到3种限制酶,则分别命名为HindⅠ、HindⅡ和HindⅢ。

限制性核酸内切酶的分类
Ⅰ类限制性核酸内切酶? 由3种不同亚基构成,兼具有修饰酶活性和依赖于ATP的限制性内切酶活性,它能识别和结合于特定的DNA序列位点,去随机切断在识别位点以外的DNA序列。这类酶的作用需要Mg2+,S腺苷甲硫氨酸及ATP。
Ⅱ型限制性核酸内切酶
与Ⅰ型限制性核酸内切酶相比, Ⅱ型限制性核酸内切酶的特点是其切割位点在识别序列上与之靠近,并产生具有粘性末端或其它末端的一定长度的DNA片段。其三个基本特性如下:
在DNA分子双链的特异性识别部位,切割DNA分子产生链的断裂;2个单链断裂部位在DNA分子上的分布通常不是彼此相对的;断裂形成的DNA片段往往具有互补的单链延伸末端。

限制性核酸内切酶的作用
限制性核酸内切酶,是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶,切断的双链DNA都产生5’磷酸基和3’羟基末端。不同限制性核酸内切酶识别和切割的特异性不同。
识别序列(切割位点、靶子序列)
绝大多数的Ⅱ型限制性核酸内切酶,都能识别4-8个核苷酸组成的特定核苷酸序列,我们称这样的序列为核酸内切酶的识别位点,限制酶就是从识别序列内切割DNA分子的。
有些识别序列是连续的,(如GATC),有些识别序列是断裂的(如GANTC),共同的特点是,它们具有双重旋转对称的结构形式,即回文结构。

Ⅱ型限制性核酸内切酶的靶子位点是多样的,靶子序列长度不一样的限制酶,对DNA分子的随机切割频率不同。
由限制酶的作用造成的DNA分子的断裂类型通常有两种:
两条链上的断裂位置是交错的、但是对称地围绕一个对称轴排列,这种断裂的结果是形成具有粘性末端的DNA片段;两条链上的断裂位置是处在一个对称结构的中心,这样形成的是平末端DNA片段。
粘性末端,是指DNA分子在限制酶的作用下形成的具互补碱基的单链延伸末端结构,它们能够通过互补碱基间的配对重新环化,具平末端的DNA片段不易环化。
有两种类型的限制酶都可以产生粘性末端:一种是形成具有3’-OH单链延伸的粘性末端;另一种是形成具有5’-P单链延伸的粘性末端.

不过实验步骤没学过~

什么都不懂!!!

限制性核酸内切酶的命名
用属名的头一个字母和种名的头两个字母,组成3个字母的略语表示寄主菌的物种名称,如大肠杆菌(Escherichia coli)用Eco表示,流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)用Hin表示;如有株名,再加上一个字母,一种特殊的菌株,具有几个不同的限制与修饰体系,则以罗马数字表示在该菌株中发现某种酶的先后次序。
例如:从流感嗜血杆菌d株(Haemophilus influenzae d)中先后分离到3种限制酶,则分别命名为HindⅠ、HindⅡ和HindⅢ。

限制性核酸内切酶的分类
Ⅰ类限制性核酸内切酶? 由3种不同亚基构成,兼具有修饰酶活性和依赖于ATP的限制性内切酶活性,它能识别和结合于特定的DNA序列位点,去随机切断在识别位点以外的DNA序列。这类酶的作用需要Mg2+,S腺苷甲硫氨酸及ATP。
Ⅱ型限制性核酸内切酶
与Ⅰ型限制性核酸内切酶相比, Ⅱ型限制性核酸内切酶的特点是其切割位点在识别序列上与之靠近,并产生具有粘性末端或其它末端的一定长度的DNA片段。其三个基本特性如下:
在DNA分子双链的特异性识别部位,切割DNA分子产生链的断裂;2个单链断裂部位在DNA分子上的分布通常不是彼此相对的;断裂形成的DNA片段往往具有互补的单链延伸末端。

限制性核酸内切酶的作用
限制性核酸内切酶,是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶,切断的双链DNA都产生5’磷酸基和3’羟基末端。不同限制性核酸内切酶识别和切割的特异性不同。
识别序列(切割位点、靶子序列)
绝大多数的Ⅱ型限制性核酸内切酶,都能识别4-8个核苷酸组成的特定核苷酸序列,我们称这样的序列为核酸内切酶的识别位点,限制酶就是从识别序列内切割DNA分子的。
有些识别序列是连续的,(如GATC),有些识别序列是断裂的(如GANTC),共同的特点是,它们具有双重旋转对称的结构形式,即回文结构。

Ⅱ型限制性核酸内切酶的靶子位点是多样的,靶子序列长度不一样的限制酶,对DNA分子的随机切割频率不同。
由限制酶的作用造成的DNA分子的断裂类型通常有两种:
两条链上的断裂位置是交错的、但是对称地围绕一个对称轴排列,这种断裂的结果是形成具有粘性末端的DNA片段;两条链上的断裂位置是处在一个对称结构的中心,这样形成的是平末端DNA片段。
粘性末端,是指DNA分子在限制酶的作用下形成的具互补碱基的单链延伸末端结构,它们能够通过互补碱基间的配对重新环化,具平末端的DNA片段不易环化。
有两种类型的限制酶都可以产生粘性末端:一种是形成具有3’-OH单链延伸的粘性末端;另一种是形成具有5’-P单链延伸的粘性末端.