一级国家重点学科排名:过氧化氢酶的测定

你好！！

　　使用过氧化氢酶检测试剂盒是比较简便的方法：

　　过氧化氢酶检测试剂盒(Catalase Assay Kit)是一种简单易行的通过显色反应来检测细胞、组织或其它样品中过氧化氢酶

　　(Catalase)活性的试剂盒。在过氧化氢相对比较充足的情况下，过氧化氢酶可以催化过氧化氢产生水和氧气。残余的过氧化
　　氢在过氧化物酶(Peroxidase)的催化下可以氧化生色底物，产生红色的产物(N-(4-antipyryl)-3-chloro-5-sulfonate-p-
　　benzoquinonemonoimine)，最大吸收波长为520nm。用过氧化氢标准品，制作标准曲线，这样就可以计算出样品中的过氧化氢
　　酶在单位时间单位体积内催化了多少量的过氧化氢转变为水和氧气，从而可以计算出样品中过氧化氢酶的酶活力。
　　Ø 过氧化氢酶分布非常广泛。在肝脏、肾脏和红细胞中，过氧化氢酶的水平非常高，这些器官和细胞是清除能导致氧化损伤的过氧

　　化氢的主要场所。
　　Ø 过氧化氢酶的活性也可以用紫外分光光度计测定A240，但蛋白质或其它组份在A240附近都有比较强的吸收，会对测定产生严重干

　　扰。因此，用紫外法测定过氧化氢酶的活性，比较适合纯化的过氧化氢酶。本试剂盒通过检测A520来测定过氧化物酶催化下由过
　　氧化氢氧化生色底物产生的红色产物，受干扰的因素小，检测灵敏度高，可以检测出低达1U/ml的过氧化氢酶。
　　Ø 本试剂盒可以检测全血、红细胞裂解产物、血清、组织匀浆产物、细胞裂解产物等生物样品中的过氧化氢酶的活性。一个试剂盒

　　共可以进行100次检测。

　　使用方法：

　　配制250mM过氧化氢溶液。本试剂盒提供的过氧化氢浓度约为1M。由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的

　　实际浓度。把浓度约为1M的过氧化氢用本试剂盒提供的过氧化氢酶检测缓冲液稀释100倍，使过氧化氢的浓度约为10mM。测定
　　A240。
　　过氧化氢(mM)=22.94XA240

　　从而计算出本试剂盒提供的过氧化氢的实际浓度。然后再根据实际的过氧化氢浓度配制250mM过氧化氢溶液。

　　b. 配制5mM过氧化氢溶液。根据测定得到的实际过氧化氢浓度配制5mM过氧化氢溶液。

　　c. 配制显色工作液。在冰浴上溶解显色底物，适当分装后再使用，尽量避免反复冻融。其它试剂放置在冰浴上备用。取适当量的过
　　氧化物酶，按照1:1000的比例用显色底物稀释，配制成显色工作液。例如取5微升过氧化氢酶，加入5ml显色底物，混匀即得到
　　5ml显色工作液。
　　2. 样品的准备：

　　用适当的裂解液裂解细胞或组织(可以使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液进行裂解)。用本试剂盒提供的过氧化氢酶检测

　　缓冲液稀释样品，裂解好的样品至少加入等体积的过氧化氢酶检测缓冲液进行稀释。具体的稀释倍数可以参考表1。