查人人中国名人网云阳县徐峰个人简历:PCR技术中为什么不用解旋酶
来源：百度文库 编辑：查人人中国名人网 时间：2024/05/09 14:53:18
用高温使DNA解旋，因此要求DNA聚合酶耐高温，
若用解旋酶解旋，是否可以不要求聚合酶耐高温
若用解旋酶解旋，是否可以不要求聚合酶耐高温
之所以不用解旋酶是因为难以控制。
解旋酶一般只能打开很短一部分的DNA双螺旋，在具体PCR操作的时候无法控制其具体在什么时间打开那一段DNA，更无法控制其具体能作用多少时间。详细一点说，我们没有办法知道DNA解旋酶打开的是模板DNA与引物结合的部分，还是不结合的部分，还是干脆分开了和模板结合的引物；我们也不能保证DNA解旋酶解开DNA的那段时间足够长以便让引物和模板结合，而且引物和模板结合后，解旋酶还能立刻移开以免阻碍DNA合成酶的前进；我们更没法让DNA在复制的过程中，DNA解旋酶一直走在复制叉的前方来帮助DNA复制等等。有很多不可控的因素使得我们现阶段不可能在体外让DNA解旋酶按照我们希望的模式来工作。
在细胞内，解旋酶需要DNA复制复合物（下图）的帮助才可以精密地调节DNA的复制，在体外实验中，每多引入一种蛋白质就会让实验体系更加复杂、更加难以控制、更加高成本，所以DNA变性的工作就都交给高温了。
pcr仪其实就是一个高级的“电炉子”，它可以瞬间的升高或降低温度，大约每秒种6摄氏度。
第一步：高温解旋，大约加温到90多度吧（大概是），DNA双链氢键断裂瞬间解旋
第二步：退火，你应该听说过吧，PCR仪大约在十秒之内吧温度降到60多度，这时“引物”会抢在双链形成氢键之前结合上去。
第三步：dNMP开始结合上去，合成开始了，都是5'端向3'端进行，不会出现冈奇片断，因为DNA已经解开了，哈哈
DNA双链的解旋是边解旋边复制，单链不能存在很长时间就复性了。而且解旋酶在体外作用的条件也比较负责，成本比较高。
pcr的意义在于大量的得到gene拷贝，还是高温变性效果稳定，成本低。
当然也许你所提的是一个更好的idea
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